论文部分内容阅读
目的:探讨小胶质细胞NADPH氧化酶活化在百草枯和代森锰联合染毒损伤多巴胺能神经元中的作用,阐明百草枯和代森锰致神经毒性的作用机制。方法:20只雄性成年C57BL/6J小鼠随机分为对照组和百草枯（PQ,10mg/kg）+代森锰（MB,30mg/kg）联合染毒组（n=10/组）,经腹腔注射染毒,每周两次,共六周,采用免疫组化法检测黑质纹状体区多巴胺能神经元退变和小胶质细胞活化水平;超氧化物阴离子荧光探针DHE检测黑质纹状体区活性氧含量。同时,建立原代中脑神经元-胶质细胞混合培养、小胶质细胞去除培养和小胶质细胞单独培养体系,利用免疫组化和Western blot,检测PQ+MB联合染毒对多巴胺能神经元损伤和NADPH氧化酶活化的影响;利用NADPH氧化酶抑制剂apocynin,采用免疫组化方法,检测抑制NADPH氧化酶对百草枯+代森锰神经毒性的干预效果。结果:与对照组相比,PQ+MB染毒组小鼠黑质纹状体区酪氨酸羟化酶免疫反应阳性（TH+）神经元数量和TH染色光密度均明显下降,差异有统计学意义（p<0.01）。染毒后PQ+MB组小鼠黑质纹状体区小胶质细胞标记物Iba-1和CD11b的染色光密度显著增加,活性氧产生明显增多,与对照组相比差异有统计学意义（p<0.01）。离体细胞结果显示,在中脑神经元-胶质细胞混合培养中去除小胶质细胞明显减弱了PQ+MB诱导的多巴胺能神经毒性（p<0.01）;PQ+MB染毒明显增加了NADPH氧化酶调节亚基p47phox在小胶质细胞胞膜中的含量,同时降低了p47phox在胞浆中的含量,与对照组相比差异有统计学意义（p<0.01）;与对照组相比,神经元-胶质细胞混合培养预处理NADPH氧化酶抑制剂apocynin显著减弱了PQ+MB诱导的活性氧产生和多巴胺能神经变性缺失,差异有统计学意义（p<0.01）;结论:PQ+MB染毒可诱导小胶质细胞NADPH氧化酶活化,从而引起多巴胺能神经元变性坏死。