山羊转人乳铁蛋白基因成纤维细胞和乳腺上皮细胞单克隆的制备及扩大培养

来源 :中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:anavelgato234
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
为了探索单个转基因阳性细胞快速扩大培养成为细胞克隆的技术体系,本研究将转染人乳铁蛋白(Humanlactoferrin,hLF)基因乳腺特异性表达载体pBLM-C1的单个山羊胎儿成纤维细胞(fetal fibroblasts,FF)和乳腺上皮细胞(mammary gland epithelial,MGE)细胞进行克隆。在96孔板中,首先用3种浓度(v/v:0%、50%和100%)的适应条件培养基对单个转染细胞进行细胞单克隆的制备,进而把转染细胞单克降与非转染细胞共培养进行扩大培养,neo基因被用于筛选基因,以PCR鉴定转染细胞基因组DNA。结果:(1)100%适应性条件培养基能够显著提高细胞单克隆存活率(FF:21.43%vs.3.70%;MGE:13.64%vs.0.00%);(2)转染细胞单克隆与非转染细胞共培养,显著提高了转染细胞单克降扩大培养后的比率(FF:53.33% vs.10.00%;MGE:33.33% vs.6.67%),且明显缩短了扩大培养汇合时间(约20 d);(3)PCR鉴定结果表明,上述方法获得的克降细胞整合有hLF目的基因。 本研究结果可为分离转基因细胞、理想载体的插入及诊断挺供了一种可靠的方法,并能节省转基因动物生产的费用及时间。
其他文献
在养兔业向着集约化、规范化、工厂化的方向发展的趋势下,免的繁殖管理就成为一个很重要的问题。 同期发情技术能够对兔的繁殖进行很好的管理,但目前该项研究在兔方面比较少
会议
将不同浓度的咖啡因和维生素E分别添加于冷冻前的小尾寒羊精液稀释液中,用精子活率、顶体完整率和畸形率,作为判定精子冷冻品质的指标,初步确定两种稀释液添加成分对小尾寒羊精
目的:建立羊驼毛囊干细胞的分离和培养方法。方法:先用0.25%的胰酶和0.02%的EDTA分离得到单个毛囊,利用0.2%的中性蛋白酶消化获得毛囊干细胞,采用“两步酶”消化法进行细胞培养,倒
试验将30只8月龄的健康雄性比格犬随机分成五组,对犬灌服含有不同剂量组合的三聚氰胺和三聚氰酸混合胶囊,以研究不同浓度的三聚氰胺及其衍生物对犬肾脏和睾丸功能的影响。在试
会议
目的:研究在冷冻稀释液中分别添加不同浓度咖啡因或谷胱甘肽对犬精液冷冻效果的影响,以优化犬精液冷冻方案,提高解冻后精子质量。 方法:在犬的常规精液冷冻稀释液中分别添加不
会议
目的:研究在常规冷冻稀释液中分别添加不同浓度的乙二醇作为保护剂,并与甘油作为冷冻保护剂进行对比,以优化犬精液冷冻方案,提高解冻后精子质量。 方法:在犬的常规精液冷冻稀
会议
在插艾包粽空气香龙舟竞赛水飞扬的日子里,我回到了阔别多年的故乡邵东,拜访了县楹联家协会主席唐贤甫先生虽然这次见面的时间很短很仓促,但唐老给我留下的印象却是那么深刻,
上世纪70年代末,一个农场主在大西洋沿岸买了个农场,急需找人帮忙照看。农场主开出很高的价钱,可一直没人来。因为农场的活很辛苦,而且当地气候恶劣,常有暴风雨,人们都觉得危险。  一天,一个20岁的小伙子找上门来,称愿意干这份工作。农场主问他:“你是干活的好手吗?”他说:“是的。”虽然农场主觉得他年纪有些轻,但也只能雇佣他。不过,他果然没说谎,农场主好几次来农场,都看到他在很勤快地干活。  一天深夜,
出生后一个月是仔猪睾丸细胞增殖的关键时期,但睾丸细胞在这一时期的增殖能力如何变化并不清楚。 本试验以7、21、35日龄仔猪为实验材料,利用免疫组织化学分析了睾丸细胞增
会议
有很多记忆,早已被时间抽空。但一些片段却始终在,即使记忆中的人,早已不是儿时的模样。  那年我6岁,表哥7岁。因为调皮捣蛋,母亲早早便将我送入了小学一年级的教室。表哥家虽在另外一个城市,但在提前入学这件事上,他与我有着同样的待遇。  一年级过后的那个暑假,我“获准”去表哥家玩。白天,表哥带着我走遍大街小巷“见世面”,去小区围墙边上他家“开垦”的地里看他种的西瓜;晚上,他趁父母都睡着了,把我从睡梦中