SD乳鼠原代心肌细胞成活率过低一直是有待解决的关键之处,其中消化分离过程对细胞成活率影响很大.因此,对心肌细胞消化分离过程中需注意的关键事项进行探讨.(1)消化酶：原代培养前常采用消化分离法消化组织,使组织块分散为单个细胞,利于细胞贴壁生长.常用的消化酶包括：胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ或Ⅱ和透明质酸酶,其中①胰蛋白酶消化能力作用较强,但对细胞间质中的蛋白成分及肌细胞膜蛋白有很强的破坏作用,容易造成心肌细胞损坏,目前常用浓度为0.05％ ～ 0.25％,而且胰蛋白酶与EDTA或其他酶的联合应用,可减小对细胞的损害,具有更好的消化分离效果；②胶原酶作用较缓和,可消化心肌组织中的胶原纤维,因此适当的应用胶原酶可充分分散成团的心肌细胞,对细胞的损伤小,但由于心肌组织中存在的胶原类型不单一,Ⅰ型和Ⅱ型胶原酶的联合应用消化效果更佳,同时常与胰蛋白酶的结合,可提高消化效率和细胞活力,但过程较复杂；③透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.(2)消化时间：消化过度可使肌原纤维出现萎缩,对细胞的存活率有一定影响,或丧失贴壁能力,消化不足细胞聚集成团,难以进行形态学观测,因此每次消化时间须结合消化酶种类及浓度确定.(3)消化温度：消化温度过高会增加消化酶的毒性,过低会降低酶的活性,一般适宜温度为35～37℃.(4)消化次数：消化次数的多少也会很大程度影响细胞的收率,多次消化需经过几次转移,会丢失很多细胞,且多次操作也会影响细胞的活力,但是分次消化可减轻胶原酶或胰蛋白酶对单细胞的破坏作用.若次数过少也会影响组织的消化程度,因此应结合实验条件对消化次数进行一定的摸索.总之,消化酶的种类、浓度、消化时间、温度及次数都会对组织离散效果影响较大,甚至会损伤细胞,导致培养细胞失去贴壁生长能力,增加心肌细胞死亡率,因此对心肌细胞原代培养消化条件的探索应相当的重视.