【摘 要】
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利用固相pH梯度(Immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(Two-dimensional e-lectrophnoresis,2-DE)分离人肺鳞癌组织及癌旁正常支气管上 皮组织的总蛋白质,凝胶经银染
【机 构】
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中南大学湘雅医院医学实验研究中心,长沙410008湖南师范大学生命科学学院,长沙410081
【出 处】
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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛
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利用固相pH梯度(Immobilized pH gradient,IPG)双向凝胶电泳(Two-dimensional e-lectrophnoresis,2-DE)分离人肺鳞癌组织及癌旁正常支气管上 皮组织的总蛋白质,凝胶经银染显色后,采用ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laserdesorption／ionization time-of-flight mass spectrom-etry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptide massfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。
结果发现：
1)得到了分辨率较高、重复性较好的人肺鳞癌组织和癌旁正常支气管上皮组织的双向凝胶电泳图谱,癌组织和癌旁正常支气管上皮组织各3块凝胶的平均蛋白质点数分别为1349±67和1297±73,平均匹配的点数分别为1235±48和1183±56,匹配率达91.5％和91.2％；同一癌组织的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性.不同胶问蛋白质点在等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是(O.873±O.125)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的偏差为(1.025±O.213)mm。
2)比较分析15例肺鳞癌组织及癌旁正常支气管上皮组织的双向凝胶电泳图谱,平均匹配的点数为1069±45。
3)对40个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与瘤基因、细胞周期调控、信号传导等有关的蛋白质。结果表明,建立了分辨率高且重复性较好的人肺鳞癌组织与癌旁正常支气管上皮组织的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了一些与肺鳞癌癌变相关的差异表达的蛋白质,为进一步筛选肺鳞癌特异性的分子标志物打下了坚实的基础。
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