副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌,该细菌培养条件苛刻、分离及生化鉴定较困难,发病鸡临床症状不典型且病程缓慢,这都加大了临床诊断和实验室检测的难度。本实验的目的在于研制出该菌的种特异性单抗,并在此基础上建立起特异性较强、敏感性较好的检测方法。本实验以副鸡禽杆菌C型标准菌株Modesto菌株的血凝素蛋白HA为抗原,四次免疫8周龄的BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。通过间接ELISA和Western进行筛选,将获得的阳性细胞进行亚克隆,筛选稳定分泌单克隆抗体的细胞株。经5次亚克隆后共获得11株针对副鸡禽杆菌血凝素蛋白HA的特异性单抗,分别命名为3D3、1D6、5C9、4C3、4G1、6G2、5D2、1E8、3F5、4F5、4G2,以上单抗腹水的间接ELISA效价在105~3×106之间,直接平板凝集在23~25。免疫球蛋白亚类试剂盒鉴定结果表明:3D3、1D6、4C3、4G1、5D2、4F5、4G2属于IgG1亚型,5C9、6G2、1E8属于IgG2b亚型,而3F5属于IgG2a亚型。特异性实验结果表明:11株单抗只与副鸡禽杆菌反应,而不与巴氏杆菌、禽嗜血杆菌、放线杆菌发生交叉反应,显示出比较好的种特异性,本研究在研制出副鸡禽杆菌HA蛋白的特异性单克隆抗体的基础上建立了能检测副鸡禽杆菌的夹心ELISA方法,并应用此方法对几种临床中常见病原菌和已获得的副鸡禽杆菌进行了检测,结果证实,本方法具有较好的特异性和敏感性,而且操作简便、快速,是一种使用于鸡传染性鼻炎的诊断、流行病学调查、检疫和监测的有效方法。这些都为有效控制该病的暴发提供了必要的生物材料和方法。