一个线粒体膜蛋白限制球孢白僵菌氧化胁迫反应和毒力

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Hog1 MAPK信号途径参与调控昆虫病原真菌球孢白僵菌逆境胁迫反应和毒力。为探究Hog1途径介导白僵菌逆境胁迫反应的分子基础,本研究构建了一个减法杂交(SSH)文库,筛选获得了14个Hog1途径的下游基因。其中,一个靶标克隆H64在正常和高渗胁迫下在Δhog1突变体中显著下调,而在氧化胁迫下则显著上调。序列分析发现,该克隆编码蛋白在N-端和C-端分别含有一个AMP-binding domain和FAD/NAD(P)-binding domain,中间含有5个典型的穿膜结构。体外表达检测结果显示,该蛋白具有核黄素结合活性。结合亚细胞定位预测及GFP标签验证,该蛋白是定位于线粒体。破坏H64基因导致菌株对氧化胁迫耐受性增强,而超量表达菌株则对氧化胁迫高度敏感,由此将其编码蛋白命名为Ohmm(oxidative homeostasis membrane-protein mitochondria)。与野生菌株相比,ΔOhmm积累了高水平的活性氧,干扰了线粒体膜电位平衡,改变了细胞壁成分和胞内糖醇积累。破坏Ohmm导致菌株分生孢子产量降低了80%左右,但加速了孢子萌发速度。利用"经典"的体壁侵染和微量注射两种方式接种大蜡螟幼虫进行生物测定,结果表明,破坏Ohmm显著提高了菌株毒力,而超量表达菌株的毒力则略有降低。由此表明,Ohmm负介导球孢白僵菌氧化胁迫反应和毒力。在Δhog1菌株中破坏Ohmm基因,则一定程度上恢复了Δhog1的氧化敏感性,进一步证实了Ohmm是Hog1 MAPK的靶标基因。
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